(A)酶标抗体的间接方法的步骤。
样品制备:
- 石蜡用水脱蜡。
- 将冷冻切片在0℃下在4℃下在丙酮中浸泡10分钟。
01 MPBST冲洗,5分钟3。
- 首先用PBS洗涤细胞载玻片,然后在4℃下在丙酮中固定10分钟,然后在0℃下固定。
01 MPBST冲洗,5分钟3。
2,石蜡切片应用抗原修复,不得使用其他样品。
3.内源性过氧化物酶的阻断:将3%H 2 O 2 - 甲醇溶液在室温下温育5-10分钟(在湿盒中)。
4,0
01 MPBST冲洗,5分钟3。
5,5?10%正常山羊血清(0。
(1MPBS)并在室温下孵育30分钟(在潮湿的盒子中)。
6.不要洗涤血清,加入用一抗稀释的1%BSA(PBST制剂),在37°C下孵育60分钟或在4°C下孵育过夜(在潮湿的盒子中)。
7,0
01 MPBST冲洗,5分钟3。
8,将HRP标记的二抗在室温下孵育1小时或在37℃下孵育30分钟。
9,0
01%H 2 O 2?0。
05%DAB着色(需要重新设置颜色溶液)。
用PBS冲洗三次后,将醇梯度脱水,二甲苯变澄清,密封明胶甘油并在显微镜下观察。